RNA编辑器-CRISPR/CasRx系统设计

CRISPR/Cas13该系统是目前为止发现的唯一能够水解RNA的酶，该该系统的发现扩展了CRISPR该系统在病毒干扰之外的应用领域。CRISPR/CasRx该系统是新发现的Cas13酶第四种HIV-（Cas13d）的家族成员，在体液外哺乳动物细胞内的RNA裂解过程中所显示单单更超强的抗原和更高的敲除效率，而且CasRx比之后发现的所有HIV-都要小很多，更容易利用AAV载体实现体液的运输，因此在RNA编辑之外具有极大的应用领域前景。

CRISPR/Cas13该系统概述 目前为止，Cas13家族合共鉴定单单四种HIV-，以外Cas13a（别称C2c2）、Cas13b、Cas13c和Cas13d，四种Cas13HIV-酶分子量除此以外小于Cas9酶。

所有Cas13酶除此以外具有两种相异的催化反应活性：

①由两个较高等的真核和真核细胞酶质相辅相成（Higher eukaryotes and prokaryotes nuceotide-binding，HEPN）结构域透过的RNase活性，这是靶RNA水解所前提的。Cas13 四个HIV-同源性较少，且同源序列值得注意HEPN结构域位点，此外两个HEPN结构域中所的单点等位基因会使CRISPR/Cas13了该系统RNA的夫割能力实际上丧失；

②催化反应pre-crRNA原材料和逐步形成成熟crRNA的RNase活性。

布1. VI CRISPR/Cas该系统设计左布

CRISPR/Cas13该系统的防御机制 主要以外以下几个阶段（以Cas13a为例）：

①pre-crRNA的识别与相辅相成。新转录的pre-crRNA通过crRNA的5’故又称茎环结构与Cas13a的REC枝识别并相辅相成，逐步形成pre-crRNA与Cas13a核糖体的中所间过渡态；

②成熟crRNA的逐步形成。NUC区的Helical-1和HEPN2结构域之间保守残基的构象时有不定，从而逐步形成一个酸碱催化反应中所心，催化反应复合物夫pre-crRNA逐步形成成熟的crRNA。此时的crRNA-Cas13a核糖体处于无复合物夫活性状态；

③crRNA-Cas13核糖体复合物夫活性的应答。靶ssRNA进入crRNA-Cas13a核糖体液与crRNA时有发生双链连续性配对，诱发Cas13a时有发生构象变化，从而应答crRNA-Cas13a核糖体的复合物夫活性；

④靶RNA的水解。在crRNA的指引下，Cas13a的HEPN结构域催化反应靶ssRNA的复合物夫。有时细菌细胞内中所会单单现非抗原复合物夫的可能会，导致细胞内中所其他附属ssRNA的水解，引起一定的细胞内口服，但这种现象在哺乳动物细胞内中所并未单单现，其原因目前为止尚未可知。

布2. CRISPR/Cas13该系统效用机制

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